Sacubitril/valsartán mitiga la remodelación cardíaca, la disfunción sistólica y preserva la calidad mitocondrial en un modelo de regurgitación mitral en ratas

Apr 14, 2024

Scientific Reports volumen 13, número de artículo: 11472 (2023) Citar este artículo

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Sacubitril/valsartán (SAC/VAL), un bloqueador del receptor de angiotensina-inhibidor de neprilisina, se ha utilizado ampliamente para tratar varios tipos de insuficiencia cardíaca. Sin embargo, los efectos de los fármacos en pacientes con insuficiencia mitral, desde el nivel molecular hasta los efectos terapéuticos, siguen sin estar claros. Este estudio investiga las funciones de SAC/VAL en la función cardíaca, la calidad mitocondrial, la autofagia, la mitofagia y los péptidos natriuréticos en un modelo de rata con insuficiencia mitral crónica. Se sometieron a ratas macho Sprague-Dawley a inducción de RM (n = 16) y a cirugías simuladas (n = 8). Cuatro semanas después de la cirugía, las ratas con RM confirmada se dividieron aleatoriamente en grupos MR (n = 8) y SAC/VAL (n = 8). Al grupo SAC/VAL se le administró SAC/VAL, mientras que las ratas MR y simuladas recibieron vehículo mediante sonda oral diariamente durante 8 semanas. La geometría cardíaca, la función y la fibrosis miocárdica se evaluaron mediante ecocardiografía e histopatología. Se realizaron espectrofotometría y PCR en tiempo real para evaluar los efectos farmacológicos sobre la calidad mitocondrial, la autofagia, la mitofagia y los péptidos natriuréticos. Las ratas MR demostraron una dilatación significativa del corazón izquierdo y una disfunción sistólica del ventrículo izquierdo en comparación con el grupo simulado, que podría mejorar significativamente con SAC/VAL. Además, SAC/VAL redujo significativamente la remodelación cardíaca y la fibrosis del miocardio en ratas MR. SAC/VAL mejoró la calidad mitocondrial al atenuar la producción de especies reactivas de oxígeno mitocondrial y la despolarización mitocondrial en comparación con el grupo MR. Además, la regulación positiva de la expresión de genes del sistema de péptidos natriuréticos y relacionados con la autofagia, relacionados con la mitofagia en ratas MR se atenuó mediante el tratamiento con SAC/VAL. En conclusión, este estudio demostró que el tratamiento con SAC/VAL podría proporcionar numerosos efectos beneficiosos en condiciones de RM, lo que sugiere que este fármaco puede ser un tratamiento eficaz para la RM.

La insuficiencia mitral es la enfermedad valvular más prevalente en la población de edad avanzada1, y la enfermedad cardíaca más común en perros de mediana edad y razas pequeñas2. El sistema renina-angiotensina-aldosterona (SRAA) y el sistema de péptidos natriuréticos (NP) son mecanismos esenciales que se aceleran como mecanismos compensatorios para preservar el gasto cardíaco y estabilizar el estado hemodinámico cuando se produce insuficiencia mitral y sus consecuencias, incluido el volumen del ventrículo izquierdo (VI). sobrecarga, disfunción sistólica del VI y remodelación del VI3,4. Sin embargo, si la progresión de la IM se desarrolla continuamente con la activación crónica de estos sistemas, se convertirán en un círculo vicioso que culminará en la posterior insuficiencia cardíaca (IC)5. La IC es una consecuencia necesaria de la IM, lo que resulta en una tasa de mortalidad alta y creciente en todo el mundo6.

Recientemente, los estudios han mencionado varios mecanismos celulares que contribuyen a la progresión de la enfermedad a través de la IC. La sobrecarga de volumen y la activación del RAAS son factores críticos que inician la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS), lo que induce daño y disfunción mitocondrial y conduce a lesión cardíaca, remodelación e IC7. Durante este período, la regulación positiva de la autofagia es responsable del recambio disfuncional de proteínas y la preservación de la biogénesis celular8,9. La proteína 1A/1B-cadena ligera 3 (LC3) asociada a microtúbulos, un indicador de autofagia, está regulada positivamente en MR10 y se asoció significativamente con la gravedad de la miólisis en MR11. Según este punto de vista, continuamente se desarrollan nuevas intervenciones farmacológicas para pacientes con IC que se centran más profundamente en los mecanismos implicados en la fisiopatología de la enfermedad12. Los fármacos que puedan afectar positivamente a estos mecanismos serán tratamientos eficaces para los pacientes cardíacos a largo plazo.

Sacubitril/valsartán (SAC/VAL) combina un bloqueador del receptor de angiotensina II tipo 1 (AT1R) y un inhibidor de neprilisina, ARNi, y fue aprobado por la Administración de Alimentos y Medicamentos de EE. UU. para el tratamiento de la insuficiencia cardíaca (IC) con fracción de eyección reducida en 201513. Los mecanismos duales de SAC/VAL son inhibir la sobreactivación del SRAA patológico a través de un bloqueador AT1R y mejorar los efectos saludables de las NP al degradar la enzima neprilisina y tener efectos potencialmente sinérgicos14. Estudios anteriores revelaron que SAC/VAL mejoró la función cardíaca y limitó la remodelación, la inflamación y la fibrosis cardíacas en estudios experimentales y clínicos de enfermedades cardiovasculares14,15,16,17. Los estudios clínicos en pacientes con IC informaron que los fármacos redujeron significativamente las tasas de hospitalización y mortalidad18 y mitigaron el volumen regurgitante en pacientes con IM funcional secundaria19. Además, cada vez hay más evidencia que respalda que SAC/VAL tiene efectos beneficiosos para atenuar la producción de ROS, mitigar la disfunción mitocondrial y la desactivación de la autofagia en ratones con miocardiopatía inducida por doxorrubicina, ratas con sobrecarga de presión y ratas con síndrome cardiorenal17,20,21.

No obstante, los efectos de SAC/VAL sobre la función cardíaca, la remodelación cardíaca y la fibrosis en condiciones de RM no se han investigado a fondo. Además, aún no se han dilucidado los efectos de SAC/VAL sobre la calidad mitocondrial y los mecanismos de autofagia/mitofagia en la RM. En consecuencia, este estudio tiene como objetivo evaluar los efectos potenciales de SAC/VAL sobre la geometría cardíaca, la función cardíaca, la calidad mitocondrial y la autofagia en un modelo de rata con IM crónica.

La RM inducida por cirugía se realizó mediante punción de la valva mitral posterior en ratas para evaluar si SAC/VAL atenúa el agrandamiento del corazón izquierdo secundario a la RM y preserva la función del VI. Luego, la administración del fármaco se realizó 4 semanas después de la cirugía y se continuó diariamente durante 8 semanas. Al final de las 8 semanas después de la medicación, se utilizó una ecocardiografía torácica para evaluar la geometría y la función cardíaca.

Cuatro semanas después de la inducción de la RM, se confirmó mediante ecocardiografía una dilatación significativa de la aurícula izquierda (LA) y del VI después de la RM (Fig. 1a, b). Todas las ratas con MR demostraron un área de chorro de MR promedio de 47,31% ± 4,1%, mientras que el chorro de MR no se exhibió en las ratas simuladas (Fig. 1c). Además, hubo una dilatación de la AI significativamente marcada (Sham: 1,39 ± 0,03 vs. MR: 1,98 ± 0,05, P < 0,05) junto con un aumento en el volumen telediastólico (Sham: 1,18 mL ± 0,04 mL vs. MR: 1,51 mL ± 0,06 ml, P <0,05) a las 4 semanas después de la inducción por RM (Fig. 1d, e). Otros parámetros de las funciones del VI no fueron diferentes entre el grupo simulado y el de RM.

Imágenes de ecocardiografía representativas de grupos de insuficiencia mitral y simulada al inicio del estudio (a, b). El grupo de RM demostró un aumento significativo en el área del chorro de RM en comparación con el grupo simulado (c). La operación de RM aumentó significativamente la relación entre la aurícula izquierda y la raíz aórtica (LA: Ao) y el volumen telediastólico en ratas con RM en comparación con las ratas simuladas, respectivamente (d, e). Sham n = 8, MR n = 16. Los datos se presentan como media ± SEM. La significación estadística se determinó mediante la prueba t de Student. *P < 0,05, ***P < 0,001 como se indica.

Las ratas MR demostraron un aumento significativo del área del chorro MR en comparación con las ratas simuladas (Sham: 0% vs. MR: 49,4% ± 2,45%, P <0,001), mientras que el tratamiento con SAC/VAL mostró una disminución significativa en este parámetro. en comparación con la RM (SAC/VAL: 30,52% ± 6,58%, P <0,01) (Fig. 2a). Las ratas MR presentaron un marcado aumento en la proporción entre aurícula izquierda y raíz aórtica (LA:Ao) (Sham: 1,4 ± 0,03 vs. MR: 2,59 ± 0,17 cm, P < 0,001) (Fig. 2b) y diástole del diámetro interno del ventrículo izquierdo ( LVIDd) (Simulado: 0,88 ± 0,01 cm frente a RM: 1,07 ± 0,06 cm, P < 0,01), así como sístole del diámetro interno del ventrículo izquierdo (DVI) (Simulado: 0,43 ± 0,01 cm frente a RM: 0,66 ± 0,04 cm, P < 0,001). SAC/VAL tendió a atenuar la gravedad de la dilatación del VI al reducir LVIDd (P = 0,064) y redujo significativamente las LVID (SAC/VAL: 0,5 ± 0,01 cm, P <0,001) (Fig. 2c, d), lo que estuvo acompañado de significativamente disminuyó en la gravedad del agrandamiento de LA inferido de LA:Ao en comparación con el grupo MR (SAC/VAL: 1,71 ± 0,04, P <0,001). Consistentemente con la disminución de la dilatación del VI, EDV (MR: 2,57 ± 0,35 ml vs. SAC/VAL: 1,8 ± 0,07 ml, P < 0,05) y volumen telesistólico (ESV) (MR: 0,69 ± 0,1 ml vs. SAC/VAL: 0,3 ± 0,02 ml, P <0,001) fueron significativamente menores en el grupo SAC/VAL (Fig. 2e, f). Sin embargo, el espesor de la pared del VI tanto del tabique interventricular como de la pared libre durante la sístole y la diástole no mostró ninguna alteración estadísticamente significativa entre los grupos.

Efectos farmacológicos de SAC/VAL sobre la geometría cardíaca y la función sistólica del VI. (a) Las ratas con regurgitación mitral y sacubitril/valsartán (SAC/VAL) mostraron un área de chorro de RM significativamente mayor que las ratas simuladas. Por el contrario, SAC/VAL disminuyó significativamente el área del chorro de MR en comparación con MR. (b) SAC/VAL disminuyó significativamente la relación entre la aurícula izquierda y la raíz aórtica (LA:Ao) en comparación con la RM. (c, d) Se observó una reducción significativa de la diástole del diámetro interno del ventrículo izquierdo (DVId) y de la sístole del diámetro interno del ventrículo izquierdo (DVI) en el grupo SAC/VAL en comparación con el grupo MR. (e, f) El volumen telediastólico y el volumen telesistólico (ESV) disminuyeron significativamente con el tratamiento con SAC/VAL en comparación con el tratamiento con vehículo. (g, h) El tratamiento con SAC/VAL aumentó el acortamiento fraccional (FS) y la fracción de eyección (EF) en comparación con las ratas tratadas con vehículo. Sham n = 8, MR n = 8, SAC/VAL n = 8. Los datos se presentan como media ± SEM. La significación estadística se determinó mediante un ANOVA unidireccional seguido del post-hoc de Tukey para comparaciones múltiples. *P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001 como se indica.

Se observó una disminución altamente significativa del acortamiento fraccional (FS) (Sham: 50,86% ± 0,82% vs. MR: 38,31% ± 1,48%, P < 0,001) junto con una disminución significativa de la fracción de eyección (EF) (Sham: 86,09% ± 0,66% frente a RM: 72,97% ± 1,75%, P <0,001) en el grupo de RM en comparación con el grupo simulado (Fig. 2g, h), lo que apunta a disfunción sistólica del VI. La administración de SAC/VAL previno significativamente la disfunción sistólica del VI al demostrar una FS (SAC/VAL: 47,6% ± 1,03%, P < 0,001) y una FE (SAC/VAL: 83,17% ± 0,96%, P < 0,001) significativamente mayores en comparación con las ratas MR (Fig. 2g, h).

Al final del estudio, el corazón se extrajo y se pesó para obtener la relación peso del corazón (HW) por peso corporal y se incluyó para un estudio histopatológico. La morfología macroscópica de todo el corazón se comparó entre tres grupos (Fig. 3a). Desde la histopatología, los hallazgos descriptivos de la tinción con hematoxilina y eosina (H&E) analizados por un patólogo revelaron que el miocardio de algunos animales de todos los grupos tenía una degeneración miocárdica leve, es decir, degeneración hialina, desorganización de los miocitos y miofibrillas cardíacas. Esta alteración morfológica se presentó en unas pocas áreas pequeñas del miocardio; no se encontraron diferencias notables entre los grupos (Sham, MR, SAC/VAL) (Fig. 3b). Sin embargo, la tinción tricrómica de Masson de la sección del VI del grupo de RM demostró un área de fibrosis significativamente mayor que la del grupo simulado (Sham: 0,31% ± 0,06% vs. RM: 1,97% ± 0,25%, P < 0,001), lo que podría reducirse significativamente con SAC/VAL (SAC/VAL: 0,53% ± 0,17%, P <0,001) (Fig. 3c, f).

Remodelación estructural del VI y fibrosis. (a) Imágenes representativas de hallazgos macroscópicos del corazón de todos los grupos. (b) Tinción representativa de hematoxilina y eosina (H&E) en el ventrículo izquierdo (VI) seccionado en todos los grupos de estudio al final del estudio. (c) Imágenes representativas de cortes del VI teñidos con tinción tricrómica de Masson en ratas simuladas, MR y sacubitril/valsartán (SAC/VAL). El área de fibrosis se presenta en azul. (d, e) La reducción significativa en la remodelación cardíaca, determinada por el área de la sección transversal de los miocitos del ventrículo izquierdo (CSA) y la relación peso del corazón por peso corporal (HW:BW), se demuestra en el grupo de administración de SAC/VAL en comparación con el grupo de MR. grupo. (f) Cuantificación del área de fibrosis miocárdica (%). SAC/VAL limitó significativamente el área de fibrosis en comparación con las ratas MR. Sham n = 8, MR n = 8, SAC/VAL n = 8. El área de fibrosis (%) se cuantificó como el área teñida con colágeno/toda el área seccionada) × 100. Los datos se presentan como media ± SEM. La significación estadística se determinó mediante un ANOVA unidireccional seguido del post-hoc de Tukey para comparaciones múltiples. ***P < 0,001 como se indica.

El HW (simulado: 1,71 ± 0,03 g frente a MR: 2,24 ± 0,09 g, P < 0,001), área de sección transversal de miocitos del ventrículo izquierdo (CSA) (simulado: 133,5 ± 8,8 µm2 frente a MR: 204,0 ± 11,2 µm2, P < 0,001), y HW:BW (Sham = 0,0028 ± 0,0001 g vs. MR: 0,0037 ± 0,0001 g, P < 0,001) demostraron una remodelación significativa del corazón izquierdo en el grupo MR en comparación con el grupo simulado. El SAC/VAL mitigó significativamente la remodelación cardíaca inferida del peso del corazón (SAC/VAL: 1,73 ± 0,06 g, P < 0,001), CSA (SAC/VAL: 133,9 ± 2,4 µm2, P < 0,001) y HW: BW (SAC /VAL: 0,003 ± 0,0001 g, P <0,001) (Fig. 3d, e).

Las evaluaciones de la calidad mitocondrial se realizaron mediante espectrofotometría. La amplitud máxima de inflamación mitocondrial no difirió entre los grupos simulado y MR, mientras que SAC/VAL tendió a disminuir en este parámetro (MR: 0,035 ± 0,01 vs. SAC/VAL: 0,011 ± 0,002, P = 0,071) (Fig. 4a ). La condición de la enfermedad tuvo una marcada disminución en el potencial relativo de membrana mitocondrial (Sham: 0.51 ± 0.02 vs. MR: 0.43 ± 0.02, P <0.05) (Fig. 4b) y una tendencia a aumentar la producción de ROS mitocondrial (Sham: 2913 ± 169 vs. RM: 3961 ± 514, P = 0,074) (Fig. 4c). Curiosamente, en comparación con las ratas MR, SAC/VAL preservó y mejoró significativamente la calidad mitocondrial al mantener el potencial de la membrana mitocondrial (SAC/VAL: 0,546 ± 0,03, P <0,01). Además, la administración de SAC/VAL de la producción de ROS mitocondrial cardíaca significativamente atenuada causada por la RM (SAC/VAL: 2372 ± 110, P <0,01).

Análisis de calidad mitocondrial al final de 8 semanas de administración del fármaco. (a) Sacubitril/valsartán (SAC/VAL) reveló una tendencia a disminuir la inflamación mitocondrial en comparación con la regurgitación mitral. (b) SAC/VAL previno significativamente el cambio de potencial de la membrana mitocondrial causado por la RM. (c) El tratamiento con SAC/VAL disminuyó significativamente la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) mitocondriales en comparación con las ratas tratadas con vehículo. Sham n = 8, MR n = 8, SAC/VAL n = 8. Los datos se presentan como media ± SEM. La significación estadística se determinó mediante un ANOVA unidireccional seguido del post-hoc de Tukey para comparaciones múltiples. *P < 0,05, **P < 0,01 como se indica.

La expresión de ARNm de genes relacionados con la autofagia y la mitofagia en el tejido del VI se determinó mediante RT-PCR para determinar si SAC/VAL influye en los mecanismos de autofagia y mitofagia. La expresión de ARNm de LC3 y p62 aumentó 1,4 veces y 1,2 veces debido a la RM, respectivamente, lo que indica una regulación positiva de estos genes en ratas con RM. El SAC/VAL reveló una reducción en la expresión del ARNm de LC3 y p62 de 1,3 y 1,4 veces (Fig. 5a, b). Además, en comparación con la simulación, la RM redujo la expresión del ARNm de la quinasa 1 inducida por PTEN (PINK1) en 1,4 veces. Por el contrario, no hubo alteración en la expresión del ARNm de Parkin. Curiosamente, SAC/VAL redujo ligeramente la expresión de estos genes relacionados con la mitofagia en 1,1 veces en comparación con las ratas MR (Fig. 5c, d).

Expresión de genes relacionados con la autofagia, genes relacionados con la mitofagia y genes relacionados con las NP al final del estudio. (a, b) Sacubitril/valsartán (SAC/VAL) atenuó significativamente la regulación positiva de los genes asociados a la autofagia (LC3 y p62) en ratas con insuficiencia mitral. (c, d) Hubo una ligera regulación negativa en los genes relacionados con la mitofagia (PINK y Parkin) debido al tratamiento con SAC/VAL. ( e, f ) La regulación positiva de los niveles de expresión de ARNm del péptido natriurético auricular (ANP) y del péptido natriurético (BNP) cerebral (tipo B) se demostró en el grupo SAC/VAL en comparación con el grupo MR. Los datos se presentan como media ± SEM. Sham n = 8, MR n = 8, S/V n = 8. Los números en negrita indican el cambio de sham, mientras que los números en cursiva indican el cambio de MR.

También se investigaron los efectos farmacológicos de SAC/VAL sobre la expresión relativa del ARNm del péptido natriurético auricular (ANP) y del péptido natriurético (BNP) cerebral (tipo B). Los resultados revelaron aumentos en la expresión de ARNm de ANP y BNP de 11,4 y 1,8 veces debido a la RM, respectivamente. Sin embargo, las expresiones de ARNm de ANP y BNP se redujeron 9,3 veces y 2,5 veces debido al tratamiento con SAC/VAL en comparación con la RM (Fig. 5e, f).

Este estudio evaluó los efectos farmacológicos de SAC/VAL sobre la función cardíaca, la remodelación cardíaca, la fibrosis del VI, la calidad mitocondrial, la autofagia y las NP en ratas con RM crónica. El principal hallazgo de este estudio reveló que SAC/VAL previene el agrandamiento del corazón izquierdo, la disfunción sistólica del VI, la remodelación cardíaca y la fibrosis del VI en respuesta a la IM crónica. Además, SAC/VAL mantiene y preserva la calidad mitocondrial y limita la producción de ROS mitocondrial en el tejido del VI de ratas con RM crónica. A nivel molecular, el fármaco también atenuó la regulación positiva de la autofagia, la mitofagia y las NP en condiciones de sobrecarga de volumen de RM. En conjunto, estos datos sugirieron que SAC/VAL proporciona varios efectos beneficiosos para mitigar diversos procesos fisiopatológicos que generalmente conducen a la IC y promover efectos cardioprotectores en los corazones MR.

Aunque la RM es una enfermedad cardíaca prevalente en humanos y animales1,2, los efectos de SAC/VAL en este contexto de enfermedad siguen siendo escasos. En consecuencia, realizamos una cirugía inducida por RM para imitar la RM y su consecuencia, la sobrecarga de volumen, en ratas. Este modelo ha sido desarrollado, verificado y utilizado en estudios previos con el objetivo principal de evaluar los efectos farmacológicos de los fármacos cardiovasculares en las condiciones de RM22,23. Cuatro semanas después de la creación de la RM se ha mencionado como una etapa crónica de la RM en un modelo animal pequeño con dilatación sustancial del VI22. Por lo tanto, iniciamos la administración de SAC/VAL durante este período.

Como se esperaba, las ratas tratadas con vehículo MR demostraron un agrandamiento significativo del corazón izquierdo en comparación con el grupo simulado al final del estudio, lo que se evidenció por un aumento de LA: Ao, LVIDd, LVID, ESV y EDV en la ecocardiografía. Además, durante este período se observó evidencia de deterioro sistólico del VI. SAC/VAL disminuyó notablemente la dilatación de LA y LV resultante de la IM crónica. Los resultados coincidieron con estudios anteriores en los que SAC/VAL atenuó sustancialmente la LA, el agrandamiento del VI y la sobrecarga de volumen en pacientes con RM funcional y ratones y ratas experimentales con IC19,24. Además de reducir la dilatación del corazón izquierdo, SAC/VAL también preservó la función sistólica del VI, como lo indica el aumento significativo en FS y EF en comparación con MR. Estos hallazgos son consistentes con estudios previos de SAC/VAL en otras enfermedades cardiovasculares en estudios experimentales y clínicos17,25,26,27. Además, con la IM persistente en las ratas tratadas con vehículo MR, la expansión progresiva del VI y la dilatación anular pueden aumentar la gravedad de la IM sugerida por El Sabbagh y colegas28. Por lo tanto, es posible que SAC/VAL disminuya la gravedad de la IM debido a una menor remodelación del VI y, posteriormente, a una menor dilatación del anillo mitral.

También se ha observado la alteración del espesor de la pared del VI después de la administración de SAC/VAL en ratas con hipertrofia del VI secundaria a hipertensión sistémica y ratones inducidos por sobrecarga de presión29,30. En el estudio actual, se midió el CSA, un índice de hipertrofia del VI, y se demostró que la RM crónica aumentaba el CSA mientras que SAC/VAL atenuaba el CSA del VI, lo que sugiere el efecto antihipertrófico de SAC/VAL. El resultado de la CSA en este estudio también concuerda con estudios previos en ratas y ratones31,32.

En comparación con el grupo de RM, el tratamiento de 8 semanas con SAC/VAL atenuó significativamente la remodelación cardíaca. Este efecto beneficioso estuvo en línea con los informes publicados previamente en ratas con IM y ratones con miocardiopatía diabética24,33. Tras la evaluación del remodelado cardíaco, identificamos el efecto antifibrótico como otro impacto positivo de SAC/VAL. Con nuestros hallazgos, SAC/VAL mitigó eficazmente la fibrosis del VI en el corazón con sobrecarga de volumen de RM, lo que concordó con estudios previos en ratones con miocardiopatía diabética33, ratas con daño renal asociado al síndrome cardiorrenal20 y ratas con sobrecarga de presión21. Estos efectos probablemente se debieron a la combinación de la inhibición de la enzima neprilisina (NEP), que promueve y prolonga el efecto antifibrótico de las NP junto con el bloqueo del efecto fibrótico de Ang II a través de AT1R.

Además, el fármaco potencia potencialmente otras vías de Ang II posteriores (Ang II-AT2R y receptor Ang 1-7-Mas), que también proporcionan un efecto antifibrótico34,35. Estas ventajas proporcionadas por SAC/VAL se fundamentaron como un mecanismo de conocimiento asociado con la mejora de la función cardíaca. De manera similar, un estudio previo en ratones con miocardiopatía dilatada inducida por doxorrubicina también reveló este efecto beneficioso de SAC/VAL15.

The prominent role of mitochondria in cardiomyocytes is to maintain energy homeostasis. In disease conditions, a tremendous amount of ROS is generated mainly in mitochondria, causing impairment of its infrastructure and function36. Mitochondrial dysfunction is frequently associated with a shortage of energy supply and cellular dyshomeostasis, leading to cardiac injury, pathological remodeling, cardiac dysfunction, and eventual cell death37. Supporting this notion, our present study demonstrated an augmentation of mitochondrial ROS production and the mitochondrial membrane potential alteration in MR rats compared with sham rats, suggesting worsening mitochondrial quality. Similarly, a previous study reported augmented ROS production secondary to MR60%. J. Am. Coll. Cardiol. 55, 671–679. https://doi.org/10.1016/j.jacc.2009.08.074 (2010)." href="/articles/s41598-023-38694-6#ref-CR38" id="ref-link-section-d12155673e1422">38. Los resultados revelaron que SAC/VAL limitó significativamente la producción de ROS mitocondrial y la despolarización potencial de la membrana mitocondrial y tendió a disminuir la inflamación mitocondrial causada por la RM.

Además, el tratamiento con SAC/VAL disminuyó la producción de ROS mitocondrial hasta que el nivel más bajo fue inconsistente con un mejor control en el potencial de la membrana mitocondrial, lo que sugiere que SAC/VAL mantuvo y mejoró la calidad mitocondrial cardíaca. Hasta la fecha, se investigaron los efectos de SAC/VAL sobre la disfunción mitocondrial y la producción de ROS y se demostraron efectos beneficiosos similares en ratones con miocardiopatía dilatada inducida por doxorrubicina17, ratas con síndrome cardiorrenal20 y ratas con sobrecarga de presión21, describiendo que el fármaco ofrece efectos positivos esenciales sobre la bioenergética mitocondrial y protegió a los cardiomiocitos del estrés oxidativo. La vía AngII-AT1R se ha mencionado como una estimulación crítica que conduce a la producción de ROS y a la disfunción mitocondrial en el corazón defectuoso39. Se suponía que la mitigación de la formación de ROS mitocondrial mediante el tratamiento con SAC/VAL funcionaba a través de esta vía.

En este estudio, presentamos los efectos de SAC/VAL sobre la autofagia y la mitofagia en el corazón con RM. De acuerdo con un informe anterior en pacientes con RM grave11, la expresión relativa del ARNm de LC3 y p62, el marcador de autofagia, se reguló positivamente en ratas con RM en comparación con la simulación para estimular el mecanismo de autofagia para facilitar la supervivencia celular mediante la eliminación de proteínas dañadas en el tejido miocárdico. El hallazgo significativo fue que la administración de SAC/VAL demostró una regulación negativa de la expresión del ARNm de LC3 y p62 en la RM. Estos hallazgos coincidieron con un estudio anterior en el que el tratamiento con SAC/VAL redujo significativamente la expresión de las proteínas LC3, Beclin-1 y Atg-5 en ratas con síndrome cardiorenal20. Por lo tanto, la autofagia puede ser una vía adicional afectada por el fármaco. Este estudio demostró que la quinasa 1 (PINK) inducida por PTEN estaba regulada negativamente en ratas MR, mientras que la expresión del ARNm de Parkin, otro gen relacionado con la mitofagia, no cambió en condiciones de MR. En teoría, PINK, Parkin y p62 trabajaron juntos en las condiciones de la enfermedad para estimular la vía de la mitofagia40. Un estudio anterior mencionó que una disminución en la fosforilación de PINK podría resultar de una retroalimentación negativa estimulada por la sobreacumulación de PINK en el contexto de MR41. En comparación con las ratas tratadas con vehículo, el tratamiento con SAC/VAL reguló negativamente estos genes relacionados con la mitofagia. Por lo tanto, los datos indican que SAC/VAL puede afectar parcialmente la reducción de la actividad de la mitofagia.

Los niveles de expresión relativos de ANP y BNP estaban regulados positivamente en el grupo MR en comparación con las ratas simuladas. En consecuencia, los datos de un estudio previo podrían explicar que la expresión del ARNm de ANP y BNP estaba regulada positivamente en las diferentes etapas de la IC, incluida la IC compensada y la IC grave, respectivamente42. Según nuestro estudio, el tratamiento con SAC/VAL reguló negativamente la expresión de ARNm de ANP y BNP, lo que refleja la reducción de la gravedad de la sobrecarga de volumen y el estrés cardíaco, que fueron los factores esenciales inducidos por la producción de NP. Un estudio previo no demostró diferencias significativas en la expresión de las proteínas ANP y BNP en un modelo de fibrilación auricular en conejos43. Esta disparidad puede deberse a diferencias en los modelos de enfermedad y las dosis de SAC/VAL.

Según los resultados de este estudio, la combinación de las dos vías divergentes en SAC/VAL, incluido el inhibidor de NEP y el bloqueador de AT1R, demostró varios efectos beneficiosos en el contexto de la RM, especialmente los mecanismos asociados con la calidad mitocondrial y la autofagia. Por parte del inhibidor de NEP, SAC aumenta los efectos beneficiosos de las NP compuestas de diuresis y natriuresis, lo que resulta en una sobrecarga de volumen reducida, acciones anti-remodelación, anti-fibrosis y contrarrestadas del SRAA44. Al mismo tiempo, el bloqueo de AT1R, la vía patológica del SRAA, que se sobreactiva crónicamente durante la progresión de la enfermedad. Como se mencionó, genera consecuencias indeseables, entre ellas fibrosis cardíaca, generación de estrés oxidativo y disfunción mitocondrial5,7. Así, este fármaco podría contrarrestar estas consecuencias patológicas del eje AngII-AT1R. Sin embargo, otras dos vías, incluida la Ang II-AT2R y el receptor de angiotensina (1–7)-Mas, funcionan simultáneamente para contrarrestar el efecto de AT1R y, en cambio, proporcionan efectos cardioprotectores45,46. El fármaco podría tener un efecto inhibidor sobre AT1R que se opone a los efectos nocivos del eje Ang II-AT1R y potencia los efectos saludables de estas dos vías, lo que está respaldado por evidencia de un estudio previo en ratas hipertensas30. Se deben realizar más estudios para probar esta especulación y dilucidar los efectos de SAC/VAL en estos dos mecanismos subyacentes y el mecanismo preciso involucrado con la autofagia que respalda los efectos cardioprotectores del fármaco en la RM. Es importante destacar que nuestros hallazgos concluyen que SAC/VAL puede tener implicaciones clínicas prácticas para el tratamiento de la IM crónica y su consecuencia, la insuficiencia cardíaca.

El presente estudio tiene varias limitaciones. En primer lugar, aunque el modelo animal actual es útil para evaluar el efecto de la terapia médica sobre el remodelado cardíaco inducido por la sobrecarga de volumen, puede no representar la RM en humanos22. Este modelo animal es un modelo de RM primario inducido al hacer un agujero en la valva de MV. En humanos, la IM puede ser una IM primaria causada por una anomalía del aparato de la VM (p. ej., prolapso de la VM) o una IM secundaria debida a una remodelación isquémica o no isquémica28. En segundo lugar, este estudio midió la expresión del ARNm de la autofagia y la mitofagia, pero no midió el nivel de proteína de los índices de autofagia y mitofagia. El ARNm sólo se puede utilizar para predecir las tendencias de las expresiones y/o funciones de las proteínas; sin embargo, en la mayoría de los casos, los niveles de expresión de ARNm solían coincidir con los niveles de proteína47. En tercer lugar, somos conscientes de que la calidad mitocondrial está determinada por varios factores, incluida la dinámica mitocondrial (fusión y fisión), la respiración mitocondrial y la respuesta mitofágica. El estudio actual encontró que SAC/VAL preserva la calidad mitocondrial relacionada con la expresión de genes mitofágicos. Aunque en el presente estudio no se evaluó la dinámica mitocondrial (fusión y fisión), mediante la determinación de proteínas reguladas por la dinámica mitocondrial (MFN, OPA, DRP-1), es importante evaluar la dinámica mitocondrial ya que fortalecería nuestros hallazgos actuales. Se deben realizar más estudios para determinar la dinámica mitocondrial.

El protocolo con animales de experimentación fue aprobado por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales del Centro de Animales de Laboratorio de la Universidad de Chulalongkorn (número de protocolo 2073021). Se obtuvieron veinticuatro ratas Sprague-Dawley macho sanas (Rattus norvegicus) de Nomura Siam International, Bangkok, Tailandia. El peso corporal oscilaba entre 280 y 300 g. Las ratas se aclimataron en la instalación de cuarentena durante 1 semana y luego se transfirieron a la instalación estándar para roedores en el Centro de Animales de Laboratorio de la Universidad de Chulalongkorn. Se utilizó una jaula individual ventilada para alojar a las ratas en condiciones ambientales constantes de un ciclo de luz: oscuridad de 24 h y temperatura de 22 °C ± 1 °C durante todo el estudio. A las ratas se les permitió acceder a alimento y agua comerciales esterilizables en autoclave ad libitum. Todos los procedimientos con animales se realizaron de acuerdo con los principios éticos de animales de laboratorio y la Guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio48. Todos los métodos informados están de acuerdo con las pautas de ARRIVE.

Se indujo RM en 16 ratas, mientras que a las otras 8 ratas se les realizó una operación simulada. Primero, se anestesiaron las ratas utilizando una cámara de inducción de isoflurano. Luego, se colocó un tubo oroendotraqueal en la tráquea y se conectó a un ventilador para roedores (Harvard Apparatus, Massachusetts, EE. UU.). El volumen corriente fue de 2,5 ml con una frecuencia respiratoria de 75 a 80 respiraciones por minuto para proporcionar una anestesia general adecuada y mantener la función respiratoria. El área quirúrgica se preparó cortando el pelaje torácico izquierdo y se limpió con una técnica de exfoliación estéril usando exfoliación con clorhexidina, solución de clorhexidina y alcohol al 70% secuencialmente. A partir de entonces, las ratas se colocaron en decúbito lateral derecho. Se administraron analgesia perioperatoria y antibióticos compuestos de tramadol (12,5 mg/kg, vía intraperitoneal: IP) y enrofloxacina diluida (10 mg/kg, vía subcutánea: SC) para aliviar el dolor quirúrgico y reducir el riesgo de infección bacteriana, respectivamente. Se realizó toracotomía izquierda a través del cuarto y quinto espacios intercostales para abordar la cavidad torácica. Se utilizó un retractor Alm para aumentar el espacio de trabajo. La RM se generó mediante una punción con aguja de calibre 20 de 1 pulgada en la valva mitral posterior a través del ápice del VI. Luego, se retiró la aguja y se aplicó la presión adecuada al VI para detener el sangrado y permitir la coagulación. Posteriormente, se realizó una ecocardiografía transtorácica para garantizar que existiera una RM significativa a través de la vista paraesternal derecha del eje largo con un flujo de mapeo en color que mostrara un área de chorro regurgitante > 30 % de la LA49. Después de la creación exitosa de MR, la pared torácica y la piel se cerraron anatómicamente con materiales de sutura adecuados. Se realizó un procedimiento quirúrgico similar sin punción del VI ni de la valva mitral para la operación simulada. Los animales en recuperación fueron trasladados a una jaula de recuperación individual donde se les proporcionó un ambiente cálido y seco y se les monitoreó hasta que presentaron un comportamiento completamente normal. Se les administró enrofloxacina diluida (10 mg/kg, SC) y tramadol (12,5 mg/kg, SID, IP) diariamente durante 5 días después de la cirugía.

Cuatro semanas después de la cirugía, se realizó una ecocardiografía transtorácica para evaluar la gravedad del modelo de sobrecarga de volumen de RM centrándose en la presencia de RM (> 30 % del área de la AI) o agrandamiento de la AI (relación entre la aurícula izquierda y la raíz aórtica; AI: Ao > 1.6) en todas las ratas y utilizado como datos de referencia. Las ratas MR (n = 16 ratas) fueron asignadas aleatoriamente a dos grupos: el grupo MR (agua potable; n = 8) y el grupo sacubitril/valsartán (SAC/VAL) (68 mg/kg PO al día; n = 8). 14. Todas las ratas recibieron los tratamientos diariamente mediante sonda oral durante 8 semanas utilizando las dosis adecuadas en el estudio anterior14. Para el grupo simulado, las ratas recibieron el vehículo diariamente (agua potable) en el mismo volumen que a otros grupos de tratamiento.

La ecocardiografía transtorácica se realizó 4 semanas después de la cirugía (línea de base) y al final de la semana 8 después de la administración del fármaco para evaluar los efectos del fármaco sobre la geometría cardíaca y la función cardíaca en todos los grupos. Para adquirir los parámetros ecocardiográficos convencionales se utilizó la máquina ecocardiográfica Mindray M9 (Mindray, Shenzhen, China) equipada con una sonda transductora de matriz de fase P10-4E (4–10 MHz). Las ratas fueron sedadas ligeramente con isoflurano y se cortó el pelaje alrededor del área torácica. Luego, las ratas se colocaron en posición reclinada lateral derecha y se conectaron electrodos electrocardiográficos (ECG) a ambas extremidades anteriores y posteriores izquierdas y se conectaron a la máquina.

La ecocardiografía convencional del VI consiste en el espesor del tabique interventricular y de la pared posterior del VI durante la sístole y la diástole (IVSd, IVS, LVPWd y LVPW) y la dimensión interna del ventrículo izquierdo al final de la diástole y al final de la sístole (LVIDd, LVID) derivadas de la M- modo de la vista del eje corto paraesternal derecho a nivel de la cabeza del músculo papilar. Desde este punto de vista, la FS del VI, la EF del VI, la EDV del VI y la ESV del VI se calcularon utilizando el método de Teichholz50,51. Se realizó una vista estándar bidimensional (2D) de eje corto paraesternal derecho en la base del corazón para adquirir la relación entre la aurícula izquierda y la raíz aórtica (LA: Ao). Se realizó una vista paraesternal derecha del eje largo con mapeo de colores para evaluar el área del chorro de RM (%), lo que indicó la gravedad de la RM22. Además, se obtuvo la velocidad del flujo aórtico (AV Vmax). Todos los parámetros se obtuvieron de un promedio de seis ciclos cardíacos consecutivos.

Al final de las 8 semanas después de la administración del fármaco, todas las ratas fueron sacrificadas con una sobredosis de isoflurano en una cámara de inducción conectada a un sistema de eliminación. El corazón se extrajo instantáneamente y se perfundió con solución salina tamponada con fosfato (PBS) helada. El peso del corazón se obtuvo para el cálculo de la relación HW a BW. La pared libre del VI se separó en tres segmentos, regiones similares, para su posterior análisis. Para la primera parte, se conservaron aproximadamente 30 mg de tejido en RNAlater y se mantuvieron a -20 °C para su posterior análisis por PCR. En otra parte, se utilizaron inmediatamente aproximadamente 300 mg de la pared libre del VI como tejido fresco del VI para el aislamiento mitocondrial y los análisis de calidad mitocondrial. La sección restante del VI se conservó en formalina tamponada al 10% y se incluyó en parafina. Luego, los bloques incluidos en el miocardio se seccionaron y se tiñeron con tinción de hematoxilina y eosina (H&E) para análisis histomorfológicos. Además, los bloques se seccionaron en rodajas de 5 µm de espesor y se tiñeron con tinción tricrómica de Masson para evaluar el colágeno y la fibrosis del miocardio. El área fibrótica se evaluó cuantitativamente a partir del escaneo de toda la sección del VI utilizando el software de análisis NIS-element BR (Nikon Corporation, Tokio, Japón): el área teñida con colágeno/toda el área seccionada × 100 y se expresó como porcentaje del área fibrótica52 . El área de la sección transversal de los miocitos del ventrículo izquierdo se midió utilizando el software de análisis BR del elemento NIS como se describió anteriormente31. Brevemente, se identificó cada miocito, se trazó su borde y se calibraron los píxeles dentro del borde con una escala para medir el área. Los datos de CSA se promediaron a partir de 30 celdas diferentes en cada imagen.

Todos los procesos asociados con los análisis de calidad mitocondrial fueron modificados a partir de estudios previos53.

Se cortó tejido del VI fresco (aproximadamente 300 mg) y se lavó en solución de PBS enfriada con hielo. Luego, el tejido se homogeneizó en tampón aislado enfriado con hielo (sacarosa 300 mM, EGTA 0,2 mM, TES 5 mM, pH 7,2: 1 ml por tejido, 100 mg). La solución de tejido homogeneizado se centrifugó a 800 x g, 4 ° C durante 10 min. El sobrenadante (S1) se transfirió a un tubo Eppendorf preenfriado y se volvió a centrifugar a 8000 x g, 4 °C durante 10 min. Luego, se descartó el sobrenadante (S2) y el sedimento mitocondrial (P2) se lavó resuspiéndolo nuevamente en un tampón de aislamiento enfriado con hielo y se volvió a centrifugar a 8000 × g, 4 ° C durante 10 minutos. Finalmente, la proteína mitocondrial cardíaca aislada se resuspendió con tampón de respiración (KCl 100 mM, sacarosa 50 mM, HEPES 10 mM y KH2PO4 5 mM, pH 7,2), y la concentración de proteína mitocondrial se determinó utilizando un ensayo de Bradford (HiMedia Laboratories, Maharashtra). , India) a λ 595 nm. Se utilizó albúmina sérica bovina como estándar proteico. La concentración final del stock mitocondrial cardíaco aislado se diluyó a 0,4 mg/ml.

La inflamación mitocondrial es la condición utilizada para determinar la sensibilidad a la transición de permeabilidad de la membrana (mPT)54. Se agregaron por separado cinco μL de tampón de respiración y CaCl2 20 mM en 2 pocillos de una placa de 96 pocillos, etiquetándolos con y sin condiciones de calcio. La reserva mitocondrial cardíaca aislada (200 μl) se pipeteó en estos dos pocillos. La placa se midió para determinar la pérdida rápida de absorbancia a λ 540 nm mediante el método espectrofotométrico en puntos de tiempo de 10 y 30 minutos a temperatura ambiente. La amplitud máxima de hinchazón mitocondrial (∆OD540 nm) se calculó a partir de la densidad óptica a los 10 min (OD1) –30 min (OD2)55. Un aumento en la ∆OD540 nm indicó inflamación mitocondrial.

Para evaluar la producción de ROS mitocondrial se utilizó diacetato de 2′7′-diclorofluoresceína (DCFH-DA) no fluorescente, que fue hidrolizado por ROS en las mitocondrias y cambió su forma a 2′,7′-diclorohidrofluoresceína (DCF) fluorescente56. El stock mitocondrial cardíaco aislado se incubó con DCFH-DA 2 μM (preparado a partir de 5 ml de tampón respiratorio + 10 μl de stock de DCFH-DA 1 mM) a 37 °C en la oscuridad durante 30 minutos. Se utilizó un lector de microplacas de fluorescencia con excitación de λ 485 nm y emisión de λ 530 nm para determinar la intensidad de fluorescencia del DCF, lo que indicó el aumento en la producción de ROS.

En este estudio se utilizó el colorante JC-1 o yoduro de 5,5′,6,6′-tetracloro-1,1′,3,3′-tetraetilbencimidazolcarbocianina (5 μM) para una estimación indirecta del cambio potencial de la membrana mitocondrial ( ∆ψm). Se incubaron cinco μM de JC-1 (preparado a partir de 5 ml de tampón respiratorio + 10 μL de stock de JC-1 2,5 mM) con stock mitocondrial cardíaco aislado a 37 °C en la oscuridad durante 30 minutos. Cuando se produce la despolarización de la membrana (aumento de ∆ψm), la expresión de la fluorescencia roja y verde se altera, lo que lleva a una disminución en la proporción rojo:verde54. La intensidad de la fluorescencia roja y verde se midió mediante un lector de microplacas de fluorescencia con excitación a λ 485 nm y emisión a λ 530 nm para fluoresceína roja y λ 590 nm para verde. Los resultados revelaron la relación de intensidad de fluorescencia rojo: verde.

Los niveles de expresión de genes relacionados con la autofagia (conjugado LC3-fosfatidiletanolamina y p62), genes relacionados con la mitofagia (PINK y Parkin) y péptidos natriuréticos (ANP y BNP) se determinaron mediante análisis de PCR en tiempo real. El ARNr 18S fue seleccionado y utilizado como control interno en este estudio. Las secuencias de cebadores utilizadas de estos genes se obtuvieron de un estudio previo en cardiomiocitos de rata y se muestran en las Tablas 157,58,59. El ARN total se extrajo del tejido del VI utilizando un mini kit de ARN tisular AccuPure (AccuBioMed®, New Taipei City, Taiwán) de acuerdo con las instrucciones del fabricante y se transcribió de forma inversa al ADN complementario de la primera cadena (ADNc) utilizando la transcripción inversa iScript™. supermezcla (BioRad, Hercules, EE. UU.). El nivel de expresión de los genes objetivo y los genes de mantenimiento se detectó mediante análisis de PCR en tiempo real utilizando PowerUp™ SYBR™ Green Master Mix junto con QuantStudio™ 5 (Thermo Fisher Scientific, Massachusetts, EE. UU.), realizando duplicados por reacción. Las condiciones de reacción estándar fueron 95 °C durante 15 s, 60 °C durante 15 s y 72 °C durante 1 min con un total de 40 ciclos. El ciclo umbral (CT) del ARNr 18S se utilizó para normalizar el CT de los genes diana (∆CT). A partir de entonces, se calculó el cambio de expresión de ARNm de los genes diana en el grupo de control y el cambio de expresión de ARNm de los genes diana en el grupo MR utilizando la fórmula 2 − ∆∆CT60.

El análisis estadístico se realizó utilizando el software comercial de estadística IBM® SPSS® (SPSS Inc., IL, EE. UU.). Las variables continuas se demuestran como media ± error estándar de la media (SEM). Se realizó la prueba t de Student para diferenciar la diferencia entre los grupos Sham y MR al inicio del estudio. Se utilizó la prueba ANOVA unidireccional con corrección de Tukey para comparaciones múltiples para evaluar los efectos farmacológicos de los fármacos entre los grupos. El valor de p <05 se consideró estadísticamente significativo.

Los datos que respaldan los hallazgos de este estudio están disponibles del autor correspondiente previa solicitud razonable. Es posible que algunos datos no estén disponibles debido a restricciones éticas o de privacidad.

Péptido Natriurético Atrial

Receptor de angiotensina II tipo 1

Péptido natriurético cerebral (tipo B)

Peso corporal

Área transversal

Volumen telediastólico

Fracción de eyección

Volumen telesistólico

acortamiento fraccional

Insuficiencia cardiaca

peso del corazon

Relación peso del corazón por peso corporal

auricular izquierdo

Relación entre aurícula izquierda y raíz aórtica

Proteína asociada a microtúbulos 1A/1B-cadena ligera 3

ventrículo izquierdo

Diástole del diámetro interno del ventrículo izquierdo

Sístole del diámetro interno del ventrículo izquierdo

Regurgitación mitral

enzima neprilisina

Sistema de péptidos natriuréticos

Quinasa 1 inducida por PTEN

Sistema renina-angiotensina-aldosterona

Especies de oxígeno reactivas

Sacubitril/valsartán

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Descargar referencias

Los autores desean agradecer al Centro de Animales de Laboratorio de la Universidad de Chulalongkorn (CULAC) por su contribución en especie.

Este estudio fue apoyado por la Escuela de Graduados de la Universidad de Chulalongkorn con motivo del 90.º aniversario de la beca de la Universidad de Chulalongkorn para LT y AK (Número de financiamiento GCUGR1125641038M). Este estudio también fue financiado en parte por el presupuesto Nacional de CULAC (Número de Financiamiento 390252002).

Departamento de Fisiología, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Chulalongkorn, Bangkok, Tailandia

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Departamento de Fisiología, Facultad de Farmacia, Universidad Mahidol, Bangkok, Tailandia

Nakkawee Saengklub

Instituto de Ingeniería Biomédica (BMEI), Universidad de Chiang Mai, Chiang Mai, Tailandia

Sarawut Kumphune

Centro de Investigación de Innovación e Ingeniería Biomédica, Universidad de Chiang Mai, Chiang Mai, Tailandia

Sarawut Kumphune

Departamento de Patología, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Chulalongkorn, Bangkok, Tailandia

Yaowalak Panyasyas

Centro de animales de laboratorio de la Universidad de Chulalongkorn (CULAC), Universidad de Chulalongkorn, Bangkok, Tailandia

Anusak Kijtawornrat

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LT, NS y AK concibieron el proyecto, diseñaron y realizaron experimentos con animales in vivo. LT, AK y SKT analizaron los resultados. LT, NS, PB, AK y SK realizaron análisis de calidad mitocondrial. LT realizó RT-PCR. LT e YP realizaron una evaluación histopatológica. LT y AK redactaron el manuscrito; NS, SK, SKT y AK supervisaron y realizaron una revisión crítica del manuscrito. Todos los autores revisaron y aprobaron la versión enviada del manuscrito.

Correspondencia a Anusak Kijtawornrat.

Los autores declaran no tener conflictos de intereses.

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Reimpresiones y permisos

Tantisuwat, L., Saengklub, N., Boonpala, P. et al. Sacubitril/valsartán mitiga la remodelación cardíaca, la disfunción sistólica y preserva la calidad mitocondrial en un modelo de regurgitación mitral en ratas. Representante científico 13, 11472 (2023). https://doi.org/10.1038/s41598-023-38694-6

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Recibido: 29 de marzo de 2023

Aceptado: 12 de julio de 2023

Publicado: 16 de julio de 2023

DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-023-38694-6

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Investigación veterinaria de BMC (2023)

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